制備型超高速(gāo sù)離心機(jī)的幾種分離方法：
    A．差速離心：逐次增加離心力，每次可沉降樣品溶液中的一些組份。
    差速離心是一種**常用的方法。在這種方法中，離心管在開(kāi)始時(shí)裝滿了均一的樣品溶液。通過(guò)(tōng guò)在一定速度下一定時(shí)間的離心后，就可得到兩個(gè)部份：沉淀和上清液。
    通常在**次離心時(shí)把大部分不需要的大粒子沉降去掉。冷凍離心機(jī)就是利用離心力使得需要分離的不同物料得到加速分離的機(jī)器。冷凍離心機(jī)有分為低速、高速冷凍離心機(jī)，以及超速分析、制備兩用冷凍離心機(jī)等多種型號(hào)。這時(shí)所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速(gāo sù)度離心，把所需的粒子沉積下來(lái)。離心的時(shí)間要選擇(xuanze)得當(dāng)，使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對(duì)于得到的沉淀和上清液可以進(jìn)行進(jìn)一步的離心，直到達(dá)到所需要的分離純度為止。
    差速離心的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，但分離純度不高。
    B．密度（單位:g/cm3或kg/m3)梯度離心法：可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離(Separation)，具有很好的分辨率。
   
　　(1)速率區(qū)帶法(ratezonal)：
    根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸(size)大小及沉降速度(S)。大致步驟如下：
    在離心管中裝入密度梯度溶液，溶液的密度從離心管頂部**底部逐漸增加(increase)(正梯度)。
    將所需分離的樣品小心地加**密度梯度(gradient)溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。
    由于不同大小的粒子在離心力作用下，在梯度中移動(dòng)的速度不一樣，所以經(jīng)過(guò)離心后會(huì)形成幾條分開(kāi)的樣品區(qū)帶。
    注意：樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度。離心(Centrifugal)過(guò)程必須在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止。
   
　　(2)等密度離心法(isopycnic)：
    根據(jù)粒子的不同密度來(lái)分離。離心過(guò)程中，粒子會(huì)移**與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。
    密度樣度的選擇要使梯度(gradient)的范圍(fàn wéi)包括所有待分離(Separation)粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后，樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。
    注意：平衡后粒子的分離完全由其密度決定，與時(shí)間無(wú)關(guān)，此時(shí)再改變離心轉(zhuǎn)速，只能改變區(qū)帶的相對(duì)位置。
    密度（單位:g/cm3或kg/m3)梯度分析法
   
　　(1)梯度介質(zhì)性質(zhì)與選擇(xuanze)：
   
　　A、應(yīng)具備的性質(zhì)：
    梯度物質(zhì)(substance)的選擇(xuanze)原則是滿足分離方法的基本要求，一個(gè)理想的密度材料標(biāo)準(zhǔn)它應(yīng)是：
    所形成的溶液密度應(yīng)包括所需要的密度范圍。冷凍離心機(jī)又稱沉淀器，類型有用來(lái)將液體中的懸浮物質(zhì)很快分離出來(lái)的分離型離心機(jī)，有用濃縮和提純微粒的制備式大型離心機(jī)，還有實(shí)驗(yàn)分析用的低速分析用離心機(jī)，盡管離心機(jī)的類型不同，但功能可視為分離、濃縮、提純和分析幾類。
    具有某些性質(zhì)，如折射率，據(jù)此可測(cè)定它的濃度。
    所形成的溶液粘度低。
    不損傷所分離的樣品。
離心分離后容易除去。
    不妨礙分離積分的分析。
   
　　B、常用介質(zhì)種類：
    表
　　一、常用梯度材料在20℃密度
    B．梯度介質(zhì)(起決定作用的物質(zhì))應(yīng)用范圍：
    表
　　二、等密度（單位:g/cm3或kg/m3)梯度介質(zhì)的應(yīng)用
    表
　　三、各種大分子在蔗糖梯度液中的大約密度
   
　　(2)、梯度(gradient)溶液(Solution)的準(zhǔn)備：
    計(jì)算,稀釋
   
　　(3)梯度形狀(shape)
    梯度形狀分：線型、等速型、階梯型、平坦型、陡峭型指數(shù)梯度。
    梯度形狀(shape)對(duì)于分離是否成功非常重要：
    **常用的是線型梯度，適用于分離蛋白質(zhì)、酶、激素、核糖體亞基和一些植物(plant)病毒；等速型適用于分離脂蛋白和一些需上浮分離樣品；不連續(xù)或階梯型梯度**適用于分離整細(xì)胞、亞細(xì)胞組分以及純化一些哺乳類動(dòng)物病毒或昆蟲(chóng)病毒。等速梯度以及長(zhǎng)液柱可增進(jìn)分離能力，適用于分離核糖體亞基、多核糖體及植物病毒。
    B．梯度柱制備：
    梯度液柱可以用手工或梯度儀制備
    半注法：
    為縮減離心時(shí)間，或分離樣品較少可用半注法：下半管鋪置梯度介質(zhì)，中間加樣品，上面鋪Buffer或液體(liquid)石臘油。
   
　　(4)加樣方法與加樣量：
    將樣品加到梯度液柱上，針尖和離心管成45-60°角度，慢慢地將樣品沿管壁流到液面上去，對(duì)于DNA一類易斷的脆弱樣品，應(yīng)該用孔徑較大的移液管代替針頭，以避免剪切力對(duì)樣品的切割作用。樣品濃度是梯度柱**小密度的1/10(W/W)。
   
　　(5)轉(zhuǎn)子的選擇與效應(yīng)：
   
　　(6)分離(Separation)區(qū)帶的回收及檢測(cè)
    離心后所形成的區(qū)帶樣品的回收方法基本有四種：
    a.穿刺法
    穿刺離心(Centrifugal)管底部，使梯度溶液滴出，將一具有合適閥門(mén)的蓋帽放在離心管頂，可控制滴出速度。
    b.虹吸法：
    將一毛細(xì)管輕輕插入管底，盡量防止梯度抖動(dòng)，用微量泵逐漸滴取，以一定量滴數(shù)或體積部分收取。高速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速一般在10000～30000r/min之間，并且?guī)в兄吕湎到y(tǒng)。由于轉(zhuǎn)速較高，產(chǎn)生離心力大，是對(duì)樣品溶液中懸浮物質(zhì)進(jìn)行高純度分離、濃縮、精制，提取各種樣品進(jìn)行研究的有效制備儀器。是醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品環(huán)保等科研生產(chǎn)部門(mén)使用的重要儀器設(shè)備，廣泛用于各種藥物、生物制品，如血液、細(xì)胞、蛋白質(zhì)，酶、核酸、病毒、激素等等。
    c.加壓法：
    通過(guò)一針管將高密度的液體泵入到梯度離心管的底部，部分收集換出的溶液。
    d.切割法：
    采用專用的切割刀切割所需區(qū)帶。
區(qū)帶檢測(cè)：
    所謂區(qū)帶檢測(cè)，實(shí)際上是對(duì)水平轉(zhuǎn)子或角轉(zhuǎn)子和垂直轉(zhuǎn)子離心(Centrifugal)管中的分離物質(zhì)所做的監(jiān)測(cè)，通常只是測(cè)量(cè liáng)在260或280mm時(shí)長(zhǎng)的吸收值，以決定梯度(gradient)中的核酸或蛋白的整個(gè)分布，這個(gè)操作通常稱之為在線(online)監(jiān)測(cè)。